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組織培養スレ


1 ：2013/12/30 〜 最終レス ：2019/11/19
組織培養について語るスレ
【育種】趣味の交配・組織培養【バイテク】
http://www.logsoku.com/r/engei/1115104757/

2 ：
>>1
乙です

3 ：
前スレ落ちても皆無反応だったから興味ないのかと思ってたわ
地味に嬉しい

4 ：
いつの間にか復活してるじゃん､やったね
組織培養初めて見たいからずっと続いて欲しい
クローンで大量生産とか素敵やん

5 ：
カルスの増殖を、マグネチックスターラーで液体培地に空気混ぜ込みながら
やろうと思うんですけど問題ないですかね？
振とう培養と似たようなものなのでガス交換の量は大丈夫だと思いますが、
回転子がカルスに当たるのがストレスにならないかちょっと心配してます。
経験のある方ご意見ください。
(無理と言われてもとりあえずやってみると思いますが…)

6 ：
ストレスというか粉々になりそう

7 ：
100rpmでも回しすぎのような気がするな

8 ：
後出しみたいだけど、
ステッピングモーター使って低速タイプのスターラーを自作するつもりだから、
数十rpmくらいなら出来ると思う。モーターケチってるから本物に比べると非力だけどそこまで粘性有るものかき混ぜるわけでもないし。
材料費計算したら２万円弱で15基の回転機構を持つユニットが作れるんじゃないんかなーと皮算用してる。

9 ：
CPUファンに磁石貼り付けるのは？
低電圧なら回転数低くなるよ

10 ：
http://engei2ch.s252.xrea.com/cgi-bin/0/photo/plant4754.jpg
回転子をフラスコの底に接着して、さらに二重容器にすることで間接的に回転力を伝えられないだろうか？
フラスコの姿勢を安定させるのが難しいかも

11 ：
>>8
一応そっちの方法も考えたけど低速で回るかちょっと不安…どっちがいいかね？
そっちの構成だと15基で8千円コース。
>>10
多分フラスコがコケる。そこまでするならフラスコを台に置いて、
台ごと揺らす機構つくったほうがいいんじゃないかな

12 ：
間違えた>>8じゃなくて>>9だった
あと15基ってのはこっちのラックの置き場の問題だったわ
CPUファンなら25基/1万円くらいで作れるはず

13 ：
無加工でなければ素直に回転テーブルの方が良さそう
無菌室､植物ホルモンの入手､カルスの増殖
ほんと組織培養は地獄やで
大量生産する覚悟がないと手を出しにくい

14 ：
>>12
CPUファンでスターラーはたしかア理科のクラレが自作してた。聞いてみたら？
https://twitter.com/reraku

15 ：
>>1
乙
ネタはないがスレはいつも読んでる。
機材もそろえたけど、3.11で中断してそのまんま。

16 ：
スレが復活したので喜んで覗きに来たら
すでについていけない内容に…

17 ：
基本的なことで申し訳ありませんが教えてください
寒天培地の中に入れる｢ショ糖｣はなぜ入れるのでしょうか
カビや最近の餌になるだけで植物の生長には不要だと思うのですが
(実際水耕栽培では砂糖水なんて使わないし)
どこを見ても入れる理由が書いてありません

18 ：
>>17
エネルギー源（容器内ではほとんど光合成できない）、浸透圧調整、不定芽・不定根の形成促進
うちの本にはこう書いてあった。

19 ：
糖は光合成のかわり

20 ：
少なくとも根っこから糖分は吸収出来ないよね
カルス限定なのかな(細胞が露出してるみたいなものだから)

21 ：
無菌培養の環境なら植物体でも吸収するらしいぞ？理屈は知らんが。
ttp://www.jspp.org/cgi-bin/17hiroba/question_search.cgi?stage=temp_search_ques_detail&an_id=1792&category=mokuji

22 ：
しかし、表面を殺菌した種子を、殺菌した培養液で栽培する無菌植物では、ご指摘のように、培養液に与えた糖分が光合成の代わりをして、植物を生育させることができ、実験室ではわりと普通に行われています。これは糖を横取りする微生物がいないので可能になる

おお知らなかった｡植物も直接糖を吸収出来るんですね(ただし無菌状態に限る)
それで試験管でも育つのか･･･勉強になりました｡
やはり無菌室をどうにかしなければ

23 ：
葉でも根でも糖は吸収できる

24 ：
>>22
部屋丸ごと無菌にするなんて豪勢なことする必要ないからな？
クリーンベンチとか無菌箱で無菌操作するところだけ確保すれば良いんだから…
分かってるかも知れないけど念のため

25 ：
分かってる｡いろいろ見てるが作れる気がしねえw

26 ：
衣装ケースを横にして奥側にアルコールランプ設置しただけのでやってるが、
コンタミ発生などほとんどないよ。

27 ：
衣装ケースにエタノール吹いてからアルコールランプ使うと燃え上がりそうで怖いんだが

28 ：
関連スレで出てたPPMって薬剤の名前だったのか紛らわしい！
植物組織にダメージ与えないので、培地に混ぜ込んでコンタミ防止できるらしいけど…
メーカーの説明読む限りだとクエン酸回路と電子伝達系に作用するらしいから
作用がうっすい殺菌剤ってだけみたいに見える。
シダ、コケ、藻類、水草NGって言ってるしコレ本当に植物に悪影響無いの？
使い物になるなら、とっておきの個体用に買ってみたいんだが

29 ：
前スレだとアルコールの代わりに逆性石けん？がいいとか
PPMは外から植物を用いるのに効果的だと思う
過信は禁物。初心者が使うと技術が身につかない、らしいね

30 ：
塩化ベンベルコニウム or オスバン(商品名)だね
殺菌能力は高い｡近所の薬局で手に入るならエタノールよりいいかも

31 ：
×　塩化ベンベルコニウム
○　塩化ベンゼルコニウム
薬局によっては1本400円ぐらいで売っている事もある

32 ：
前スレの名前のまま、再立てして欲しかったな・・・。
交雑スレみたいなのがあるけど、なんかあっちじゃ前スレみたいな
話が出来ないんだよね・・・。

33 ：
>>31
逆性石けんなら塩化ベンザルコニウムじゃなくて?
日本薬局方の売場を探せば、薬局ならどこでも置いてあると思うよ

34 ：
殺菌は無水エタノール流用じゃダメ？
家族の事情により皮膚殺菌の為消毒用エタノール（７０％）の方も常備してるけど
自分用自作肌ローション添加剤目的と、自作ヨーグルトの容器殺菌に無水エタノール（９９．５％）を使ってる。
ちなみに無水エタノール、保存中に密閉が甘いと気が付いたら量がかなり減ってるので充分注意。
オスバンは昔仕事で使用してたけど、成分が微量どうしても残っちゃう
素人使いだと濃度によっては皮膚に誤って付けば炎症起こす人もいるので注意。
アレルギー体質でアトピーの自分は手袋すら使いたくなく、薬剤なるべく扱いたくないし
当時の仕事から遠ざかってかなり年月かかってるけど、心配。
（当時ヒビテン使用の頻度が多い時だけ痒くなってた）
ヨーグルトは菌類などだから、オスバンって容器殺菌には使えないかもね・・・。
他の消毒剤の話だけど容器殺菌したら、殺菌成分が残りヨーグルト（ケフィアの方）
の菌や酵母が殖えづらかったらしく失敗した事ある・・・。時間かけても固まらなかった・・・。
オスバンだけじゃ無かったのだろうけど仕事前に就く前の専門で学んでいた時に頻繁な消毒剤使用で
皮膚が荒れすぎ手の薄い皮一枚の状態が全く治らず好きな仕事をやむなく諦めた人を見てるので
経験上使用については過敏になってるのもある・・・。
無水エタノールは乾けば全く残らないし、肌に着いても乾燥するだけで後にケアすれば問題なし。
なによりも、改めてオスバンも買っちゃうと家計に響くしｗ市販品一瓶買うと、使いきれないんだもの。
個人的には、道具の殺菌に病院などでも使ってる小型高圧滅菌機が欲しいなー。
滅菌パックも個人で入手可能なら、滅菌後ある程度の期間の保存も出来るし

35 ：
あ・・・。
わかりづらい書き込みになってる・・・。
誤）ヨーグルトは菌類などだから、
正）もし、ヨーグルトなど有用菌類関係での利用では、
という事です・・・。

36 ：
無水エタノールより70%エタノールの方が殺菌力強いですよ。

37 ：
とつぜん何を言い出すんだこの人

38 ：
>>36
後学のために詳しく

39 ：
>>36は事実
100％だとすぐ蒸発してしまうけど、70％なら蒸発するのに時間がかかるぶんだけ
効果が高い。
培養を扱う論文だと、70〜80％で使用しているものがほとんど。

40 ：
そんなことは常識｡問題はなぜ>>36が突然言い出したかだ

41 ：
とりあえず>>40は>>34をよく読め

42 ：
イソプロピルアルコールじゃダメなのかな？
エタノール70％でも高いじゃん

43 ：
パッタリ書き込み無くなったな…
組織培養やってる人が少ないのか
秘密にしたいから書き込まないのかどっちなんだろうな？
割とその辺気になるわー

44 ：
上で盛り上がってたアルコールの話だけど、器具や手指の消毒に使うやつでしょ？
そこまで盛り上がるほどのことかね。
まさか培養物や培地に直接吹きかけるって話じゃないよね。

45 ：
元々過疎だから･･･
もう少し入門的な何かが欲しいね
無菌箱とか考えずに試しに寒天培地作ったらきれいなカビ玉が育成できましたやったね!

46 ：
花粉管観察用に寒天培地を冷蔵庫で半年以上保管してたらコンニャクに形質転換してたｗ
速攻でエタノールシュッシュのピューラックス原液ドブ掛けしたわ

47 ：
関連（？）スレ　
きのこ栽培
http://uni.2ch.sc/test/read.cgi/kinoko/1311490078/

48 ：
結局無菌操作なんだよ面倒くさいのは。

49 ：
誰かお手軽に作れる無菌箱の方法を確立してくれ
プラスチックの衣装ケースとか良いけど､どうやって手を入れるんだってばよ

50 ：
「無菌箱 自作」で作例は見つかる。

51 ：
風呂でいいじゃん
全身無菌箱に入るようなもんだし

52 ：
水場ってむしろ雑菌多くね？

53 ：
要は微生物が飛び込まなきゃいいのよ
霧を充満させて、それが落ちるの待てば浮遊菌も一掃出来るでしょ

54 ：
人間が動くだけでホコリが舞うんだが。

55 ：
循環式紫外線空気清浄機を自作する

56 ：
>>54
全裸にマスクとシャワーキャップ
レインコートでもいいけど、シャワー浴びたら問題ないよ

57 ：
無菌箱の中を全部両面テープで覆ったら･･･(適当

58 ：
>>56
そういや無菌操作の前にシャワー浴びて身を清める儀式が習慣になってるわ
無菌操作は宗教だったのか…

59 ：
シャワーを浴びたりはしないけど、培地をいじる時は全裸でやってます。

60 ：
そして毛がコンタミ

61 ：
あるある

62 ：
植物でもSTAP細胞と同じ方法で脱分化させたら変異起こりにくくなったりするんだろうか？

63 ：
？

64 ：
ホルモン抜きでって意味じゃない？

65 ：
クエン酸単独炭素源として培地つくったらコンタミ減るかな？

66 ：
クエン酸て菌も利用するんじゃない？濃度が高かったら
繁殖しないだろうけど、植物の酢漬けみたいになるんじゃ…

67 ：
細胞分裂の速度が早いほど効く抗癌剤みたいな菌抑制剤があればいいんだが

68 ：
抗生物質使うという手もあるらしいが

69 ：
昭和の昔の古いガーデンライフに
家庭で行うメリクロンについての手引きが載ってて
食用の酢に1分浸ける→蒸留水で洗う　を2〜3度くり返して
成長点を滅菌する方法が書いてあったな

70 ：
最近、無菌・殺菌の話ばかりだね・・・。
時には実際実施しての成功例・失敗例も聞きたいな・・・。
どんな植物を無菌培養したいとか、実際やってみたとか・・・。

71 ：
酢の殺菌効果はどれくらいなのか疑問だけど面白そう
>>70　失敗例があまりに初歩的すぎて書くのが恥ずかしいレベル
培地が固まらない、植継ぎで全滅、瓶の取り違え、等々

72 ：
無菌･殺菌がクリアできたら9割は終わってるだろ常識的に考えて

73 ：
親戚の爺ちゃんは、昔シンピジュームのメリクロンの仕事してたそうだが
ハイポネックスと潰したバナナで寒天培地を作ってたそうだ

74 ：
培地にバナナの皮入れたらポストハーベストが効いてカビ生えなさそう

75 ：
自然界の抗菌成分と言えばプロポリス。主に動物対象に付く菌に効くものだけど
これって植物に付く菌には効かないのかな？成分はミツバチが精製するけど元々は植物由来。
抗生物質のアレルギー持ちなので、代わりに抜歯や傷口を縫うほどの酷い怪我をすると必ず飲んでるが
化のう止めとして飲んでいて、自分は一度も傷周囲が腫れた事無し。持病の為に自己免疫が弱い体質なのに傷の治りも早くて良いし
風邪っぽい時も２日続けて飲んでおくと大抵悪化せずに治る。
医者には抗生物質の代わりに飲んでると必ず申告して、今まで一度も効果を否定された事も無い。
混じりッ気なしのプロポリスが入手出来れば、エキスを培地の殺菌に使えないかな。嫌気性の腐敗菌とかにも使えると良いんだけど
ただ、ミツバチが一時急激に減ってからエキス１００％のとか良質なものの入手は難しくなった・・・。
自分が入手し易くて愛飲してるのはブラジル産赤プロポリスエキスが使われてる製品で
普通のミツバチのプロポリスより成分含有が多く、より効き目が良いそうなのだけど
（以前は国産物使ってて実際違うと感じてる）なんせ余分に混ぜてあるものも多くてね、サメ肝油エキスとか・・・。
もし使えるのなら、普通のミツバチプロポリスなら周辺に養蜂業が多いので問い合わせれば少しは原料が入手できるかも。
ただ、何の植物から成分を得てるのかとか解らないし、抽出が面倒くさそうだけどね。

76 ：
プロポリスは熱に弱いそうだからオートクレーブできないんじゃね？
別の滅菌方法試さないと使えなさそう。

77 ：
ミリポアの出番か。高くつくな

78 ：
はかりとかって、どんなん使ってますか？
今まで天秤をつかっていたんだけど、0.01gだいだとかなり厳しい。
安くていいのないかな。

79 ：
教科書どおりに10倍量はかって薄めるじゃ駄目？

80 ：
>>78
自分は使用目的が違うけど、ほんの少しの粉末を計る時は計りだと正確に計れないので
（計りの単位が細かくないのと、鼻息やくしゃみで飛ばしたりが怖いｗ）
「極厚計量スプーン」というのを使ってる
自分の持ってるのは最大が１スプーンで、最小単位は1/10スプーンの４本組。
ネット通販で売ってるのは、一組にもっと本数が多くて0.1cc位まで計れるのがあるみたいだけど。
これじゃダメ？

81 ：
プロポリスで加熱がダメなのは酵素が壊れるからじゃなかったっけ？
殺菌に酵素も関係してたっけか。関係ないなら加熱して問題なさそうだけど
プロポリスの殺菌は人体内の乳酸菌などの有用菌には作用せず、悪玉だけを殺菌するとか
外部でも似た様な作用するかな・・・。

82 ：
これって高いのかな？
http://www.cosmobio.co.jp/product/detail/02860001.asp?entry_id=3072

83 ：
よくみたら販売終了ってなってたたわ
高いも安いもないな

84 ：
てか培養に通常使われる防腐剤でいいじゃん

85 ：
防腐剤ってどんなのよ？

86 ：
植物ホルモンどこで買ってる？

87 ：
農協

88 ：
実用レベル(?)の純度なら農薬の名前でググって安いとこで通販
試薬レベルのは知らん。手続きとか大変そう。あと凄い高そう。

89 ：
ベンジルアデニン(BA)とかオキシベロンとかは日本農業システムで買った
BAはビーエー液剤だっかたか
試薬なら和光純薬が適当な団体名で申し込めば売ってくれるとか前スレに書いてあったぞ

90 ：
BAとNAAの試薬はggったら普通に買えそうな所が出てくるね。
一般試薬っぽいから、変な不純物が入ってる可能性はあるが。
それより植物ホルモンの使用と農薬取締法の関係がどうなっているかよくわからない。

91 ：
急に書き込み無くなるよね。
深夜に圧力鍋で滅菌中。これが終わったら寝るんだ…

92 ：
安物の圧力鍋だと目一杯中身あると
蒸気が横から漏れたりしてやり直しになるね

93 ：
ピーターソンバナナ培地

94 ：
有機物入れたほうがいいのは分かるけど
結果がバラけそう、ウイルスが心配でやってない
それほど厳密にやってるのかと言われれば
返す言葉に詰まるのがオチだが

95 ：
オートクレーブとか圧力鍋で不活化しないウイルスっているの？

96 ：
やっぱり滅菌時に問題なくなりますか
家庭培養とはいえスーパーで売られる野菜果物を
避けてきたけど単なる思い込みだった

97 ：
ドリームジャンボがあたったらクリーンベンチ買いたいな〜
誰も分かってくれないけど

98 ：
自作か中古じゃダメなん？
家庭でやるだけなら自作が鉄板だと思うよ

99 ：
普段クリーンベンチ邪魔なんだよな
みんな何つかってる？

100 ：
日サロ


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